X-Gal的使用方法？x-gal平板-兴科数码

首先把X-gal配制成20mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液（-20℃避光保存），然后在100ml的琼脂培养基中，加入200μl的上述溶液、100μl的IPTG（24mg/ml）和100μl的Amp（100mg/ml），制作成X-gal、IPTG、Amp平板培养基。

当DNA片段插入至pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。

X-Gal的使用方法？x-gal平板-图1

实验步骤

1. LB 培养基Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g加水至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。

2. LB 抗性筛选培养基待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至终浓度 50 µg/mL，即每毫升培养基加抗生素储存液 1 µL，摇匀后，倒平板。液体 LB 抗性筛选培养基，在完全冷却后加入抗生素，加入的量与固体培养基相同。

3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培养基在含 100 µg/mL Amp 的 LB 琼脂平板上加入 40 µL X-gal 贮存液和 40 µL IPTG 溶液，用无菌玻璃涂布器把溶液均匀涂布于整个平板表面，超净工作台上吹干后备用。

4. SOC 液体培养基Tryptone20 gYeast Extract5 gNaCl0.5 g加入 950 mL 水，完全溶解后加入 250 mmol/L 的 KCl 溶液。

x–gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解后呈蓝色。

基于这个特点，pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。

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